線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅲ活性測(cè)試盒（微量法）

測(cè)定意義：線粒體復(fù)合體Ⅲ（EC 1.10.2.2）又稱CoQ-細(xì)胞色素C還原酶，廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，是線粒體呼吸電子傳遞鏈主路和支路的共有成分，負(fù)責(zé)把還原型CoQ的氫傳遞給細(xì)胞色素C，生成還原型細(xì)胞色素C。

測(cè)定原理：與氧化型細(xì)胞色素C不同，還原型細(xì)胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能夠反映線粒體復(fù)合體Ⅲ酶活性。

需要的儀器，耗材:可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣本處理
1、 稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、 4 ℃ 600 g離心10min。將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心15min。
3、 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的復(fù)合體Ⅲ（此步可選做，可以判斷線粒體提取效果）。
4、 在沉淀中加入200μL提取液，超聲波破碎（功率20%，超聲5秒，間隔10秒，重復(fù)15次），用于復(fù)合體Ⅲ酶活 性測(cè)定，并且用于蛋白含量測(cè)定。