分享看?ELISA試劑盒新老手的操作

ELISA試劑盒檢測體系可謂是免疫學反響應用到科研出產中zui為敏捷的技術手段。自己也為此苦惱過很長一段時間，跟著自己技術水平得前進，或多或少地也把握了ELISA試劑盒體系的脾氣，也是游刃有余吧，現在做方陣，做ELISA試劑盒已是輕車熟路了，曾經檢測一種抗體用整整一下戰書還算得暈暈的，現在給我十個八個的從包被到顯色，一個工作日根本搞定。

包被原的性質很重要，蛋白濃度，是否降解，這關系到你做出的抗體可不可以被其辨認，所以保存抗原很重要，我做重組蛋白時，ELISA試劑盒師兄都嚴格正告我必定要在冰浴下緩慢消融就是這個道理。封閉就是讓很多不相關的蛋白質充填這些曠地空閑，然后排擠ELISA試劑盒后的過程中干擾物質的再吸附。但有時由于實驗的需要，包被原的特殊性也可能選用中性的緩沖溶液來包。

小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯后才干固定在固相載體上。還有有的包被原可能不是蛋白，對于生物素和脂類物質或小分子物質咱們要事前對其改造再加以包被，親和素生物素:先親和素先包被載體，參加生物素化的DNA，這種包被辦法均勻、結實，已擴大應用于各種抗原物質的定量測定。常用的包被液除了方才說到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。

過程中老是會泛起或大或小的標題，本人在剛開始做ELISA試劑盒時就面臨良多災題，固然有師兄師姐鋪路，但仍是常常做得烏煙瘴氣，比如說花板，假陽性，全顯色，悉數顯色，顯色比空缺還低。

由于蛋白質與聚苯乙烯固相載體是經過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的效果，ELISA試劑盒這種物理吸附長短特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體外表。